Erzurum Yöresinde Yaşayan Glukoz 6-fosfat Dehidrogenaz Eksikliği Tespit Edilen Şahıslarda Glukoz 6-fosfat Dehidrogenaz Kinetiğinin İncelenmesi ve Mutasyon Noktalarının Moleküler Tekniklerle Taranması
Tezin Türü: Doktora
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Kimya Anabilim Dalı, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2002
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: İsmail ÖZMEN
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): Ömer İrfan KÜFREVİOĞLU
Özet:ÖZET DoktoraTezi ERZURUM YÖRESİNDE YAŞAYAN GLUKOZ 6-FOSFAT DEHİDROGENAZ (G6PD) EKSİKLİĞİ TESPİT EDİLEN ŞAHISLARDA G6PD KİNETİĞİNİN İNCELENMESİ VE MUTASYON NOKTALARININ MOLEKÜLER TEKNİKLERLE TARANMASI İsmail ÖZMEN Atatürk Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Kimya Anabilim Dalı Danışman : Prof.Dr. Ö. İrfan KÜFREVİOĞLU Bu çalışmada 1183 tane 0,5-6 yaş arası çocuktan kan alındı. G6PD enzim eksikliği olup olmadığı ve enzim eksikliğinin moleküler boyutu araştırılmıştır. Enzim aktivitesi ve hemoglobin tayini yapılarak 3 şahısta enzim eksikliği olduğu belirlendi. Amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz ve afınite kromatografısi ile enzimler saflaştırıldıktan sonra glukoz 6-fosfat dehidrogenaz enziminin kinetik özellikleri incelendi. Saflaştırılan enzimler SDS-PAGE elektroforezi yapılarak enzim saflığı kontrol edildi. Ayrıca normalde G6PD enzimini inhibe ettiği bilinen ilaçların inhibisyon etkisi bu şahıslarda incelendi. Bu şahıslarda enzimin kinetik özelliklerinin farklı olmasının yanında ilaçların inhibisyon etkisinin genelde normalden daha az olduğu, hatta bazı ilaçların enzim eksikliği belirlenen iki şahısta enzimi aktive ettiği görüldü. KM (mM) değerleri normal şahıs, Şahıs-1, Şahıs-2, Şahıs-3'te G 6-P için sırası ile 0,5, 0,15, 0,048, 0,083; NADP+ için sırası ile 0,21; 0,13; 0,07; 0,085; Vmax değerleri (umol NADP7dk x mi) G 6-P için sırası ile 32, 0,29, 0,037, 1,1 1; NADP+ için sırası ile 42, 0,39, 0,044, 2,13 bulundu. Sağlıklı ve G6PD enzim eksikliği belirlenen kişilerin kan örneklerinden total genomik DNA izole edildi. Sonra PCR amplifıkasyonu, PCR-RFLP ve/veya SSCP teknikleri G6PD geninin eksonları üzerinde mutasyon noktalarını belirlemek için uygulandı. Şahıs-2 ve Şahıs-3'te 5. eksonda, Şahıs-1 'de 6-7. eksonların bulunduğu bölgede mutasyon olduğu belirlendi. 2002, 154 sayfa Anahtar kelimeler: Glukoz 6-fosfat dehidrogenaz (G6PD), G6PD geni, G6PD eksikliği, SSCP, mutasyon