Aeribacillus pallidus C10'dan alkalin proteaz enziminin saflaştırılması,karakterizasyonu ve biyoteknolojik uygulanabilirliği,

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Moleküler Biyoloji ve Genetik Anabilim Dalı, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2014

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: VİLDAN YILDIRIM

Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): Melda ŞİŞECİOĞLU

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Bu çalışmada; termofilik bakteri olarak tanımlanan Aeribacillus pallidus C10'dan ekstra selüler alkalin proteaz enzimi saflaştırıldı ve karakterize edildi. Enzim amonyum sülfat çöktürmesi-diyaliz sonrasında DE52 anyon değişim kromotografisi ve ProbondTM afinite kromotografisi teknikleri ile sırasıyla %26,9 verimle 4,85 kat ve %19,56 verimle 17,32 kat saflaştırıldı. Enzimin molekül kütlesi SDS-PAGE ile yaklaşık 38,35 kDa olarak tayin edildi. Enzim için optimum pH ve sıcaklık sırasıyla 9 ve 60°C olarak belirlendi. Enzimin 20-80°C sıcaklıkları arasında 1 saat sonunda aktivitesinin %80'den fazlasını özellikle 60, 70 ve 80°C sıcaklıklarda kararlılığını büyük oranda koruduğu tespit edildi. A. pallidus C10'dan saflaştırılan proteaz enzimin aktivitesi üzerine metal iyonlarının etkisi incelendiğinde Mg+2, K+, Ca+2, Zn+2 ve Ag+ iyonları varlığında enzimin aktiviteyi artırdığı gözlenirken, Fe+2, Mn+2 ve Co+2 iyonları varlığında ise enzimin yüksek kararlılık sergilediği gözlendi. Enzimin oksidantlar, yüzey aktif maddeleri varlığında aktivite kaybettiği fakat %5 SDS varlığında enzimin aktivitesinde %16'lık bir artış olduğu belirlendi. Organik çözücüler varlığında enzimin aktivitesinin %70'den fazlasını koruduğu tespit edildi. Enzim, en yüksek aktiviteyi kazein subsratı için gösterdi. Enzimin serin proteaz inhibitörü PMSF ile tamamen inhibe olduğu belirlendi. EDTA varlığında ise enzimin aktivitesini koruduğu gözlemlendi. Bu enzim için KM ve Vmax değerleri sırasıyla 0,197 mg/ml ve 7,29 µmol.ml-1.dk-1 olarak hesaplandı.