Horseradish peroksidaz (HRP) enzimi üzerine bazı benzohidrazidtürevlerinin etkisinin incelenmesi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2019
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: DENİZ EREL
Danışman: Hasan Özdemir
Özet:Bu çalışmada, Horseradish peroksidaz enziminin inhibitörleri olan 3-Amino benzohidrazid ve 4-Amino benzohidrazid türevi moleküller kullanılarak tek basamakta saflaştırılması için etkili ve yeni afinite ligantlarının belirlenmesi hedeflendi. Bu amaçla, literatürde bulunan bitki peroksidaz POD saflaştırma çalışmalarına katkı sağlamak için 3-amino benzohidrazid ve türevleri olan 3-amino 5-metil benzohidrazid, 3-amino 5-metoksi benzohidrazid ve 4-amino benzohidrazid ve türevleri olan 4-amino 2-nitro benzohidrazid, 4 amino 3-nitro benzohidrazid molekülleri sentezlendi ve POD enziminin saflaştırılmasında kullanıldı. 3-Amino benzohidrazid türevi ve 4-amino benzohidrazid türevi moleküllerin metilbenzoat formlarından hidrazin sentezleri yapılarak Horseradish Peroksidaz (HRP) enzimi üzerine inhibisyon etkileri incelendi ve dönüşümlü inhibisyon gösteren moleküller Sepharose-4B-L-Tirozin jel materyaline bağlanarak elde edilen afinite jelleri tek kademede Horseradish peroksidaz (HRP) enziminin saflaştırılması gerçekleştirildi. 3-Amino 5-metil benzohidrazid molekülü kullanılarak HRP enzimi ile %2,21 verimle 70,3 kat;3-amino 5-metoksi benzohidrazid ile %2,39 verimle 135,43 kat; 4-amino 2-nitro benzohidrazid ile %6,5 verimle 151,7 kat, 4-amino 3-nitro benzohidrazid kullanılarak %1,2 verimle 60,3 kat saflaştırıldı. HRP enziminin molekül ağırlığı ve saflığı sodyum dodesilsülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile kontrol edildi ve 43-47 kDa'da aralıklarında tek bant gözlendi. Tüm kolonların saflaştırma sonuçları karşılaştırıldı ve en iyi kolon materyali olan Sepharose-4B-L-Tirozin-4-amino-2-nitro benzohidrazid kolonu ile Sepharose-4B-L-Tirozin-3-amino-5-metoksi benzohidrazid için kolon tutma kapasitesi,HRP enzimi için değişik pH, sıcaklık, iyonik şiddetlerde çalışıldı. Horseradish POD enzimi 4-amino-2-nitro benzohidrazid kolonu için optimum şartlar: pH 7,5 sıcaklık 20°C ve iyonik şiddet 0,3 M konsantrasyonunda optimum bağlanma 2060 µg/g jel ve 3-amino-5-metoksi benzohidrazid kolonu için optimum şartlar: pH 7 sıcaklık 20°C ve iyonik şiddet 0,2 M aynı şartlar altında 2363,3 µg/g jel olarak tespit edildi.