Bayır turpu (Armoracia rusticana) peroksidaz enziminin 3-aminobenzohidrazid türevleri kullanılarak afinitekromatografisi ile saflaştırılması

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2019

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: NURGÜL ABUL

Danışman: Hasan Özdemir

Özet:

Horseradish peroksidaz (HRP, E.C 1.11.1.7) sanayide, tıpta ve klinik tanılamada kullanılan önemli bir enzimdir. Bu tez kapsamında amino benzohidrazid molekülleri kullanılarak afinite kromatografisi tekniği ile bayır turpu (Armoracia rusticana) bitkisinden POD enziminin tek basamakta saflaştırılması için etkili ve yeni afinite ligantlarının belirlenmesi hedeflenmiştir. Bu amaçla 3-amino benzohidrazid türevi olan, 3-amino 5-kloro benzohidrazid, 3-amino 5-bromo benzohidrazid, 3-amino 4-metil benzohidrazid, 3-amino 4-nitro benzohidrazid moleküllerinin metilbenzoat formlarından hidrazin sentezleri yapıldı. Sentezlenen moleküllerin karekterizasyonu 1H-NMR ile doğrulandı. HRP enzimi üzerine inhibisyon etkileri incelendi. IC50 ve Ki değerleri belirlendi. Dönüşümlü inhibisyon gösteren moleküller Sepharose-4B-L-Tirozin jel materyaline bağlandı ve HRP enzimi %6,72 verimle ve 284,5 kat saflaştırıldı. Saflaştırma sonucunda elde edilen enzimler için SDS-PAGE yapıldı ve 47 kDa'da tek bant gözlendi. Kullanılma potansiyeli en yüksek olan Sepharose-4B-L-Tirozin-3-amino 4-nitro benzohidrazid afinite kolonu için pH:6, 20ºC, 0,4 M'da optimum bağlanma gözlendi.