Peroksidaz enziminin afinite kromatografisi tekniği ile karaturp (Raphanus sativus L.) ve şalgamdan (Brassica rapa L.) saflaştırılması ve karakterizasyonu

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2012

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: RAMAZAN KALIN

Danışman: Hasan Özdemir

Özet:

Enzimin inhibitörü olan 4-aminobenzohidrazit molekülü tirozine kenetlendirilerek yeni bir afinite jeli hazırlandı. Karaturp (Raphanus sativus L.) ve şalgam (Brassica rapa L.) bitkilerinden peroksidaz (POD) enzimi Sepharose-4B-L-tirozin-4-aminobenzohidrazit afinite kromatografisi kullanılarak tek basamakta sırasıyla %10,6 verimle 40,3 kat ve %9 verimle 269,3 kat saflaştırıldı. Enzim aktivitesi spektrofotometrik olarak 470 nm'de ölçüldü. Enzimlerin saflığını kontrol etmek ve molekül kütlelerini belirlemek için SDS-poliakrilamid jel elektroforezi yapıldı ve tek bant gözlendi. Molekül kütleleri karaturp (Raphanus sativus L.) POD için yaklaşık 67,3 kDa ve şalgam (Brassica rapa L.) POD için yaklaşık 65,8 kDa olarak bulundu. Enzimler üzerinde yapılan kinetik çalışmalar neticesinde optimum pH, optimum iyonik şiddet, optimum sıcaklık, stabil pH sırasıyla karaturp (Raphanus sativus L.) için 6,5, 0,1 M, 300C, 6,5 ve şalgam (Brassica rapa L.) için 6,5, 1 M, 300C, 5,0 olarak tespit edildi. Guaiakol substratı için saf enzimlerin KM ve Vmax değerleri hesaplandı ve karaturp (Raphanus sativus L.) için KM 24,88 mM, Vmax 3,23 EÜ/ml, şalgam (Brassica rapa L.) için KM 4,09 mM, Vmax 0,797 EÜ/ml olarak belirlendi. Ayrıca saf peroksidaz enzimleri üzerine 4-aminobenzohidrazit inhibitörünün inhibisyon etkisi in vitro şartlarda ayrı ayrı incelendi. 4-aminobenzohidrazit inhibitörü her iki bitki peroksidazı içinde yarışmasız inhibisyon göstermekte olup, karaturp (Raphanus sativus L.) ve şalgam (Brassica rapa L.) için sırasıyla IC50 değeri 0,726 mM ve 1,167 mM olarak, Ki değerleri ise sırasıyla 0,5947±0,0122 mM ve 1,1033±0,1016 mM olarak tespit edildi.