Bacillus licheniformis A10'dan alkalin proteaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Moleküler Biyoloji ve Genetik Anabilim Dalı, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2014

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: BAHAR YILMAZ

Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): Melda ŞİŞECİOĞLU

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Bu çalışmada Ayder Kaplıcaları'ndan izole edilen Bacillus licheniformis A10'dan ekstraselüler alkalin proteaz enzimi saflaştırıldı ve karakterize edildi. Enzim saflaştırılmasında amonyum sülfat çöktürmesi-diyaliz ve DE52 anyon değişim kromotografisi yapıldı. Proteaz enzimi %9,44 verimle 1,38 kat saflaştırıldı. Enzimin SDS-PAGE ile molekül ağırlığı yaklaşık 40,55 kDa olarak tespit edildi. Enzim için optimum pH ve sıcaklık değerleri 9 ve 70ºC olarak belirlendi. Bacillus licheniformis'e ait saflaştırılan proteaz enzim aktivitesi üzerine metallerin etkisi incelendiğinde; Mg+2, Mn+2, K+ varlığında enzimin aktivitesinin arttığı gözlenirken; Fe+2, Zn+2'nin aktiviteyi azalttığı, Ca+2'nin ise aktivitede değişime neden olmadığı görüldü. Enzimin oksidantlar, yüzey aktif maddeleri ve organik çözücüler varlığında aktivite kaybettiği tespit edildi. Substrat spesifikliği çalışmalarında; kazein, azokazein, jelatin ve bovin serum albumin (BSA) arasında enzimin en yüksek aktiviteyi kazein için gösterdiği gözlendi. Enzimin serin proteaz inhibitörü fenilmetilsülfonilflorid (PMSF) ile tamamen inhibe olduğu belirlendi. Lineweaver-Burk grafiğinden yararlanılarak tespit edilen KM ve Vmax değerleri 0,033 mg/ml ve 8,17 µmol.ml-1.dk-1 olarak elde edildi.