Sıçan (Rattus norvegicus) beyninden asetilkolinesteraz geninin klonlanması ve ekspresyonu

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Moleküler Biyoloji ve Genetik Anabilim Dalı, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2015

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: AHMET KARAKUŞ

Danışman: Orhan Erdoğan

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Bu çalışmada sıçan (Rattus norvegicus) beyin asetilkolinesteraz enzimini kodlayan gen bölgesi dizayn edilen ileri ve geri primerler ile PCR'da çoğaltıldıktan sonra uygun şartlarda pET SUMO vektörüne ligasyonu yapıldı. Bu rekombinant vektör kompetent E.coli hücrelerine transfer edilerek bu hücreler kanamisin içeren LB sıvı besiyerinde büyütüldü. Büyüyen kolonilerden koloni PCR yapıldı ve ürünler agaroz jel elektroforezi ile kontrol edildi. Pozitif koloniler plazmit izolasyonu için sıvı besiyerinde büyütüldü. Plazmit izolasyonundan sonra rekombinant bu vektörlerle çapraz PCR yapılarak genin doğru bir şekilde insört olup olmadığı kontrol edildi. Plazmitlerin doğruluğu tespit edildikten sonra rekombinant vektörler protein üretiminin gerçekleştirildiği E.coli BL21(DE3) hücrelerine transfer edildi. Hücreler 7 saat IPTG içeren sıvı besiyerinde büyütüldü ve 2 saatte bir örnek alındı. Farklı örneklerden hazırlanan homojenatlardan enzim aktivite ve SDS-PAGE analizleri yapıldı.