Calidifontibacillus erzurumensis tarafından üretilen ekzopolisakkaritin biyolojik aktivitesinin araştırılması
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Moleküler Biyoloji ve Genetik Anabilim Dalı, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2023
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: SAADET HİLAL ÖNDER
Danışman: Ahmet Adıgüzel
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Amaç: Bu çalışmanın amacı, Erzurum ili Ilıca kaplıcasından izole edilen, yeni cinsin tip türü olarak literatüre kazandırılan Calidifontibacillus erzurumensis'ten ekzopolisakarit (EPS) üretmek ve üretilen EPS'nin biyolojik, kimyasal özelliklerini incelemektir. Yöntem: EPS üretimi, 100 mL tripton soya suyu (TSB) içeren 250 mL'lik şişelerde gerçekleştirildi. Optimizasyon deneyleri sırasında, EPS üretimini artırmak için farklı pH'lar, sıcaklıklar ve inkübasyon süreleri test edildi. Ortam koşulları optimize edildikten sonra üretilen EPS, TCA işlemi, etanol çökeltme ve santrifüjleme işlemi uygulanarak saflaştırıldı. Elde edilen EPS'nin toplam karbonhidrat ve protein içerikleri sırasıyla fenol sülfürik asit ve Bradford yöntemlerine göre belirlendi. Ayrıca EPS örneğinin protein yüzdesi 230, 260 ve 280 nm'de alınan UV spektrumları kullanılarak, Warburg Christian yöntemine göre belirlendi. EPS'nin çözünürlüğü, su ve organik çözücüler (Distile su, izopropanol, etanol, metanol, aseton, kloroform, DMSO, petrol eteri, formaldehit, hekzan) içinde test edildi. Saflaştırılmış EPS'nin fonksiyonel gruplarını analiz etmek için FTIR analizi yapıldı. EPS'nin monomer bileşimi, HPLC analizine göre belirlendi. EPS'nin potansiyel biyolojik aktivitelerine sahip olup olmadığını ortaya çıkarmak için antimikrobiyal ve antioksidan aktiviteleri sırasıyla, disk difüzyon ve DPPH radikal yakalama yöntemine göre test edildi. Bulgular: C. erzurumensis'ten EPS üretimi için en uygun koşullar; 55°C sıcaklık, 8 başlangıç pH'sı ve 48 saatlik inkübasyon süresi olarak belirlendi. EPS'nin organik çözücülere kıyasla suda daha yüksek çözünürlük gösterdiği gözlemlendi. Saflaştırılan EPS'nin karbonhidrat ve protein içerikleri sırasıyla %82,3 ve %0,1 olarak belirlendi. Ayrıca FTIR analizi EPS'nin proteinlerin ve karbonhidratların varlığını gösteren fonksiyonel gruplara sahip olduğunu doğruladı. HPLC tabanlı monomer analizi, EPS'nin tekrarlanan galaktoz birimlerinden oluşan bir homopolisakkarit olduğunu ortaya çıkardı. Disk difüzyon yöntemi, EPS'nin test edilen patojenlerin hiçbirine karşı antimikrobiyal aktiviteye sahip olmadığını gösterdi. DPPH radikal yakalama yöntemine göre, EPS'nin %21,3 oranında iyi bir antioksidan etkiye sahip olduğu belirlendi. Sonuç: Bu çalışma ile yeni cinsin tip türü olarak literatüre kazandırılan C. erzurumensis'in, antioksidan aktiviteye sahip olduğunu, suda çözünebilen, hücre dışı bir homopolisakarit üretebildiği ortaya konuldu. Bu EPS'nin antioksidan aktiviteye sahip olması nedeniyle; biyoteknolojik ve tıbbi amaçlar için faydalı model olarak kullanılabileceğini biza gösterdi.