Meme Kanseri Tedavisinde Manyetik Hipertermi ve Gen Terapisi ile Dual Terapi Yaklaşımı
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Moleküler Biyoloji ve Genetik Anabilim Dalı, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2022
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: FATMA TURHAN
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): Yağmur Ünver
Eş Danışman: Ahmet Mavi
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Amaç: Bu çalışmada meme kanseri için kullanılmaya aday hedeflenebilir, etkili ve özgün bir yaklaşım olan manyetik hipertermi indüksiyonlu gen terapisi (dual terapi) yönteminin geliştirilmesi amaçlandı. Yöntem: Öncelikle ısı ile indüklenebilir promotöre (HSP promotörü; PHSP) sahip rekombinant pHSP-GFP elde edildi. Daha sonra durdurma kodonu içeren kodon optimize azurin geninin, pHSP-GFP'ye klonlanmasıyla pHSP-Azu elde edildi. Elde edilen rekombinant DNA'lar Sanger veya yeni nesil dizileme (Next Generation Sequencing) ile doğrulandı. Çalışmada gen aktarım ve hipertermi aracı olarak kullanılacak olan manyetik ve biyo-uyumlu nanopartiküllerin (MSNP-NH2) TEM, DLS ve VSM analizleriyle karakterizasyonları yapılıp, AC manyetik alan altında ısıtma kapasitesi belirlendi. MSNP-NH2'lerin plazmit DNA'ları bağlama ve salma yetenekleri DLS ölçümü ve jel elektroforezi ile tespit edildi. Manyetofektinler (MSNP-NH2+DNA+PEI) mıknatıs yardımı ile hücrelere gönderildi (manyetofeksiyon). Transfeksiyon etkinliği konfokal mikroskop, akış sitometrisi ve spektrofotometrik ölçüm ile belirlendi. Ayrıca manyetik hiperterminin tümörijenik (MCF-7) ve tümörijenik olmayan (MCF-10A) hücre hatları üzerindeki etkisi hücre canlılığı testi (MTS) ile ortaya konuldu. Son olarak, hipertermi ve gen terapisinin uygulandığı hücrelerde ikili terapinin etkinliği, apoptoz testi ve Real-Time PCR (qRT-PCR) ile gösterildi. Bulgular: Çalışma sonucunda elde edilen verilere göre MSNP-NH2'lerin plazmit DNA'ları tutabildiği ve hücre içinde bırakabildiği görüldü. PHSP'nin inkübatör veya AC manyetik alan aracılığıyla indüklenebildiği ve hedef proteinlerin hücre içerisinde üretilebildiği belirlendi. Dual terapi uygulanan hücrelerde hem apoptoz testi hem de qRT-PCR ile belirlenen BAX/BCL2 oranlarına göre MCF-7 hücrelerinin apoptotik olmayan yolla öldüğü tespit edildi. Sonuç: Bu çalışmada, dual terapinin MCF-10A üzerindeki etkisinin sınırlı olduğu, MCF-7 üzerindeki etkisinin ise daha fazla olduğu gösterildi. Ayrıca hücrelerin apoptotik yola kıyasla nekrotik yolu daha çok tercih ettiği gözlendi.