Amino benzohidrazid türevi  moleküller kullanılarak karaturp peroksidaz enziminin afinite kromatografisi tekniği ile saflaştırılması

ŞEYMA MEHTAP KOÇAK

Amino benzohidrazid türevi moleküller kullanılarak karaturp peroksidaz enziminin afinite kromatografisi tekniği ile saflaştırılması

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2018

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: ŞEYMA MEHTAP KOÇAK

Danışman: Hasan Özdemir

Özet:

Bu tez kapsamında bitki peroksidaz enzimlerinin saflaştırma çalışmalarına katkı sağlamak amacı ile 4-amino 2-nitro benzohidrazid, 4-amino 3-nitro benzohidrazid, 4- amino 2-bromo benzohidrazid ve 4-amino 3-bromo benzohidrazid molekülleri ligant olarak sentezlendi ve karaturp köklerinden peroksidaz enzimlerinin saflaştırılmasında kullanıldı. 4-amino benzohidrazid molekülleri metilbenzoat formlarından hidrazin sentezleri yapılarak karaturp POD enzimi üzerine inhibisyon etkileri incelendi. Sepharose-4B-L-Tirozin jel materyali, dönüşümlü inhibisyon gösteren moleküllere bağlanarak afinite jelleri sentezlendi ve tek kademede karaturp POD enziminin saflaştırılması gerçekleştirildi. 4-amino 2-bromo benzohidrazid molekülü kullanıldığında POD enzimi, karaturptan %28,5 verimle 258 kat, 4-amino 3-bromo benzohidrazid ile karaturptan %31,4 verimle 677 kat, 4-amino 2-nitro benzohidrazid ile karaturptan %33,8 verimle 613,3 kat, 4-amino 3-nitro benzohidrazid ile karaturptan %7,5 verimle 365,6 kat saflaştırıldı. Saflaştırılan enzimlerin saflığı ile molekül ağırlığı SDS-PAGE ile kontrol edildi. Karaturp POD enzimi için 43-47 kDa'da tek bant gözlendi. Sepharose-4B-L-Tirozin-4-amino-3-bromo benzohidrazid kolonu için kolon tutma kapasitesi, karaturp POD enzimleri için değişik pH, sıcaklık, iyonik şiddetlerde çalışıldı. Karaturp POD enzimi için optimum şartlar: pH 7,5, sıcaklık 15°C, iyonik şiddet 0,30 M olarak hesaplandı.