Lateral Flow Immunoassay (LFI) Tabanlı Alternatif Crossmatch Tanı Kiti Geliştirilmesi
Tezin Türü: Doktora
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Tıbbi Biyoloji Anabilim Dalı Başkanlığı, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2023
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: MUHAMMET ALİ GÜRBÜZ
Eş Danışman: Mesut TAŞKIN
Danışman: Hasan Doğan
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Amaç: Transplantasyon immünolojisi alanında kullanılan geleneksel CM testleri uzun çalışma süresi, yüksek maliyet, deneyimli personel ihtiyacı vb. dezavantajlara sahiptir. Bu olumsuzlukların giderilmesi amacıyla, son yıllarda sağlık alanında çokça kullanılan LFI alt yapısına sahip yeni bir CM testinin geliştirilmesi hedeflenmiştir. Materyal ve Metot: Potansiyel verici kan örneklerinden immünomanyetik izolasyon yöntemiyle CD45(+) lökositler ile yoğunluk farkına bağlı izolasyon yöntemiyle PBMC elde edildi. Hücreler, %10'luk lizis tamponu ile karıştırılıp 3000 rpm'de 3 dakika santrifüj edildikten sonra süpernatant kısmı verici hücre lizatı olarak ayrıldı. CM reaksiyonu için 24 µl alıcı serumu ve 24 µl verici hücre lizatı ile oluşan analitleri etiketlemek için 15 µl konjugat solüsyonu, 15 dakika 200 rpm çalkalayıcıda inkübe edildi. Süre bitiminde, son hacmi 100 µl'ye tamamlamak amacıyla 37 µl yürütme tamponu eklendi. Daha önce hazırlanan LFI şeritleri, süspansiyonun içine daldırılarak beş dakika boyunca nitroselüloz membrandaki renk değişimleri gözlendi. Bulgular: T1 ve T2 test çizgileri ile K çizgisindeki renk oluşumları tam pozitif CM, T1 veya T2 test çizgisi ile K çizgisindeki renk değişimi kısmi pozitif CM, yalnız K çizgisindeki renk değişimi ise negatif CM olarak değerlendirildi. Oluşan renk değişimleri hafif, orta ve yoğun olarak kategorize edilerek LFI şeritlerinin yarı kantitatif analizi yapıldı. Sonuç: Geliştirilen yöntem HLA sınıf I ilişkili pozitifleri tespit edebilirken, HLA sınıf II ilişkili pozitif reaksiyonları tespit edememektedir. HLA sınıf II 'ye spesifik yeni yakalama antikorları ile test geliştirme süreci devam ettirilecektir. Başarılı olunduğu takdirde, muadillerine kıyasla zaman ve maliyet bakımından daha avantajlı olan, deneyimli personel gereksinimi olmayan potansiyel bir CM testi ortaya çıkabilecektir.