İnsan eritrositlerinden saflaştırılan asetilkolinesteraz enzim aktivitesi üzerine bazı kimyasal maddelerin etkilerinin incelenmesi

BİLGE ÖZCAN

İnsan eritrositlerinden saflaştırılan asetilkolinesteraz enzim aktivitesi üzerine bazı kimyasal maddelerin etkilerinin incelenmesi

Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2014

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: BİLGE ÖZCAN

Danışman: Hasan Özdemir

Özet:

Asetilkolinesteraz enzimi (AChE; E.C.3.1.1.7) insan eritrositlerinden CNBr ile aktive edilen Sepharose 4B-L-Tirozin-Takrin afinite kromatografisi ile 658 kat, %23,5 verimle saflaştırıldı. Enzim saflığı SDS-PAGE ile kontrol edildi ve tek bant bulundu (70 kDa )AChE enzimi için optimum pH, optimum iyonik şiddet, optimum sıcaklık, stabil pH sırasıyla 7,6, 0,3 M, 50°C, 8,0 olarak tespit edildi. Ayrıca AChI ve DTNB substratları için KM ve Vmax değerleri sırasıyla 0,11 mM, 0,031 mM ve 0,082 EÜ/ml, 0,16 EÜ/ml olarak hesaplandı. AChE enzim aktivitesi üzerine vankomisin HCl, amikasin sülfat, pantoprazol, sefuroksim, diltizem HCl, tenoksikam antibiyotikleri, essitalopram, mirtazapin, fluoksetin, trazodon HCl, sodyum valproat, risperidon antidepresanları, BHA ve BHT sentetik antioksidanları, 2,6-diizopropilfenol(propofol), 2,6-dimetilfenol, 2,6-ditertbutilfenol, lidokain, bupivakain anestezikleri, etil alkol, aseton ve DMSO organik çözücüleri gibi farklı maddelerin inhibisyon etkileri incelendi. In vitro inhibisyon etkisi gösteren maddeler essitalopram okzalat, mirtazapin, risperidon, fluoksetin, pantoprazol, 2,6-diizopropilfenol, 2,6-dimetilfenol, 2,6-ditertbutilfenol, lidokain, bupivakain, BHA, BHT, etanol, aseton, dimetilsülfoksit için IC50 değerleri sırasıyla 1,06 mM, 0,019 mM, 0,428 mM, 1,62 mM, 1,97 mM, 5,94 µM, 6,96 µM, 36,3 µM, 260 µM, 5 µM, 32,85 µM, 36,3 µM, 2,24 M, 0,51 M, 0,51 M olarak hesaplandı. Aynı maddeler için sırasıyla ortalama Ki sabiti 1,30 mM, 0,012 mM, 0,23 mM, 1,48 mM, 1,26 mM, 3,93 µM, 2,06 µM, 18,9 µM, 14,3µM, 13,4 µM, 30,9 µM, 17,35 µM, 1,28 M, 0,19 M, 0,37 M olarak hesaplandı. İnhibisyon tipleri lidokain ve bupivakain anestezikleri için yarışmasız, diğer maddelerin tamamı için yarışmalı inhibisyon olarak tespit edildi. 2014, 149 sayfa Anahtar Kelimeler: Asetilkolinesteraz, insan eritrositi, karakterizasyon, inhibisyon