Dihidropirimidin dehidrogenaz enziminin afinite kromatografisi ile koyun karaciğerinden saflaştırılması, bazı kimyasal moleküller ve metal iyonlarının etkisinin incelenmesi

---

Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2014

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: YASEMİN CAMADAN

Danışman: Hasan Özdemir

Özet:

Bu çalışmada dihidroprimidin dehidrogenaz (DPD) enzimi ilk defa koyun karaciğerinden %16,7 verimle 402,7 kat saflaştırıldı. Saflaştırma prosedüründe DEAE iyon değişim ve 2′,5′-ADP Sepharose 4B afinite kromatografisi kullanıldı. Enzimin saflığını kontrol etmek ve molekül kütlesini belirlemek için SDS-poliakrilamid jel elektroforezi yapıldı ve tek bant gözlendi. Molekül kütlesi koyun karaciğer DPD enzimi için 111 kDa bulundu. Enzim üzerinde yapılan kinetik çalışmalar çerçevesinde optimum pH, optimum iyonik şiddet, optimum sıcaklık, stabil pH sırasıyla 8,0, 0,9 mM, 50°C, 7,5 olarak hesaplandı. Enzimin NADPH substratı için KM değeri 22,97 µM, Vmax değeri 0,17 EÜ/ml ve urasil substratı için KM değeri 17,46 µM, Vmax değeri 0,14 EÜ/ml olarak bulundu. Ayrıca essitalopram, fluoksetin, mirtazapin, haloperidal antidepresan ve propofol, 2,6-di-tert-bütilfenol, 2,6-dimetilfenol, lidokain anestezik moleküllerin enzim üzerine in vitro etkileri araştırıldı. Buna ilaveten enzim aktivitesi üzerine Ag+, Cu+2, Ni+2, Zn+2, Co+2, Fe+3, Cr+2, Cd+2 ve Pb+2 gibi metal iyonlarının in vitro etkileri incelendi. Bütün etken molekülleri ve metal iyonları için IC50 değerleri hesaplandı.