Benzohidrazid türevleri ile laktoperoksidaz enziminin afinite tekniği kullanılarak memeli sütlerinden saflaştırılması

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2016

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: NESLİHAN MACİT

Danışman: Hasan Özdemir

Özet:

Bu çalışmada hidrazin türevi olan 4-amino-2-metoksibenzohidrazid, 4-amino-3-bromobenzohidrazid ve 4-amino-3-klorobenzohidrazid molekülleri laktoperoksidaz (LPO) enziminin saflaştırılmasında ligand olarak kullanıldı. CNBr ile aktive edilmiş Sepharose-4B-L-tirozin matriksine ligandlar kovalent bağlanarak afinite kolonları hazırlandı. 4-amino-2-metoksibenzohidrazid molekülü ile yapılan saflaştırma sonucunda LPO enzimi; keçi sütünden %1,54 verimle 41,62 kat, manda sütünden %12,83 verimle 137,5 kat, sığır sütünden %5 verimle 900 kat ve koyun sütünden %9,42 verimle 135,41 kat saflaştırıldı. 4-amino-3-bromobenzohidrazid ile LPO; keçi sütünden %6,25 verimle 166,6 kat, manda sütünden %19,3 verimle 291,66 kat, sığır sütünden %15 verimle 1519 kat ve koyun sütünden %8,72 verimle 261 kat saflaştırıldı. 4-amino-3-klorobenzohidrazid afinite kolonundan ise keçi sütünden %19,8 verimle 260 kat, manda sütünden %35,3 verimle 580,6 kat, sığır sütünden %14,4 verimle 1321 kat saflaştırılırken koyun sütünden LPO enzimi %23,3 verimle 892,2 kat saflaştırıldı. Enzimlerin saflığı SDS-PAGE ile kontrol edildi ve tek bant yaklaşık 80 kDa olarak bulundu. Bu sonuçlardan hareketle benzohidrazid moleküllerinin LPO enziminin saflaştırılmasında kullanılabileceği ilk defa bu çalışmada gösterildi. Çalışılan 3 molekül arasında 4-amino-3-bromo benzohidrazid molekülünün memeli sütlerinden LPO saflaştırılmasında kullanılabilme potansiyeline sahip olduğu belirlendi. 4-amino-3-bromo benzohidrazid afinite kolonu için LPO'nun bağlanma kapasitesi 10°C'de pH:8,5 ve 0,40 M iyonik şiddet konsantrasyonunda 0,110 mg/g jel olarak belirlendi.