İnsan BCL-2 genine ait promotör bölgesinin moleküler analizi

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Moleküler Biyoloji ve Genetik Anabilim Dalı, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2018

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: BETÜL BAYDAR

Danışman: Orhan Erdoğan

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

BCL-2 (B cell leukemia/lymphoma 2), apoptozis düzenleyici proteinler olan BCL ailesinin antiapoptotik bir üyesidir ve ilk kez t(14; 18) kromozomal translokasyonu olan insan foliküler B hücre lenfomasında tanımlanmıştır. Bu tez çalışmasında, apoptotik süreçte en kritik potansiyele sahip olan antiapoptotik insan BCL-2 geninin transkripsiyonel regülasyonunu aydınlatmak amacıyla promotör bölgesinin karakterizasyonu ve moleküler analizi yapıldı. Bu amaçla öncelikle çeşitli biyoinformatik veri tabanlarından yararlanılarak BCL-2 geninin 5000 bp'lik promotör bölgesi belirlendi. Ancak çalışmamız dahilinde bu bölgenin transkripsiyonel bakımdan işlevsel olduğu düşünülen 2444 bp 'lik parçası kalıp olarak kullanılarak fonksiyonel özelliklerine göre bu bölge üç alt parçaya ayrıldı. Bölgelerin uzunlukları 2372 bp, 610 bp ve 290 bp olarak belirlenerek çalışmamız bu üç promotör parçası üzerinde gerçekleştirildi. Seçilen bölgelere spesifik dizayn edilen primerlerle PCR yapılarak her bölge saf olarak elde edildi. Her bölgeye ait bu saf bantlar jelden ekstrakte edilerek pGEM-T Easy vektörüne klonlanarak Escherichia coli JM109 bakterisine transfer edildi. Klonlanan her bir parçadan plazmit izolasyonu yapıldı. Aynı şekilde pGL-3 Luc vektörü de Escherichia coli JM109 bakterisine transfer edildi ve bu bakteride çoğaltıldı. Son olarak klonlanmış pGL-3 Luc vektörü Kpn-I ve Hınd-III restriksiyon enzimleriyle kesildikten sonra agaroz jelde yürütüldü ve jelden saf olarak ekstrakte edildi. Genomatix programı kullanılarak belirlenen bu promotör dizisi üzerinde özellikle insan BCL-2 ve BAX arasında en fazla homolojinin bulunduğu muhtemel promotör parçaları klonlanarak, pGL-3 Luc vektörüne aktarılmak üzere elde edildi.