Manyetik Nanopartikül Aracılığıyla Pichia pastoris'e Yeni Bir Gen Aktarım Yönteminin Geliştirilmesi

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Moleküler Biyoloji ve Genetik Anabilim Dalı, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2020

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: Şeyda YILDIZ

Danışman: Yağmur Ünver

Özet:

Bu tez çalışmasında Pichia pastoris mayasına şimdiye kadar gerçekleştirilen gen aktarım yöntemlerinden (LiCl-ısı şoku veya elektroporasyon vb.) farklı olarak yeni bir gen aktarım yöntemi geliştirilmiştir. Bu doğrultuda, maya hücrelerine gen aktarımında aracı olarak kullanılan manyetik nanopartiküller (Fe3O4@PEI) sentezlenmiş ve karakterize edilmiştir. Sentezlenen manyetik nanopartiküllerin maya hücreleri üzerinde toksik etkisinin olmadığı görülmüştür. Gen aktarımının doğrulanması için kullanılan yeşil floresan protein raportör geninin (Green Fluorescent Protein; GFP) kodon optimizasyonu yapılmış ve bu gen dizisi, ticari olarak temin edilen sentetik DNA'dan amplifiye edilerek pGKB ekspresyon plazmitine yerleştirilmiştir. E. coli hücrelerinde klonlanarak elde edilen rekombinant DNA (pGKB-GFP) manyetik nanopartiküller ile bir araya getirilmiş, optimum şartlarda elde edilen manyetofektin mıknatıs aracılığıyla maya hücrelerine transfer edilmiştir. Antibiyotik seçilimi ve PCR reaksiyonu ile genomlarında GFP genini taşıyan maya transformantları doğrulanmış, GFP üreten hücreler konfokal mikroskopta görüntülenmiştir. Böylece rekombinant protein üretiminde sıklıkla kullanılan P. pastoris mayasına ilk defa manyetik nanopartikül aracılığıyla gen aktarımı gerçekleştirilmiştir. Bu yöntemin, kolay bir şekilde uygulanabilir olması, ucuz olması, az miktarda DNA'ya gereksinim duyması, kompetent hücre hazırlanmasına gerek duymaması ve transformasyon işleminin kısa sürede gerçekleştirilmesi gibi birçok avantaja sahip olduğu söylenebilir.