Kuşburnu Meyvasından İzole edilen Polifenol Oksidaz Enziminin Kinetik ve Elektroforetik Özelliklerinin İncelenmesi

---

Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Kimya Anabilim Dalı, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 1994

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: Halis ŞAKİROĞLU

Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): Ömer İrfan KÜFREVİOĞLU

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Bu çalışmada, kuşburnu meyvasından polifenol oksidaz enzimi izole edilerek, çeşitli kinetik ve elektroforetik özellikleri incelenmiştir. Bu amaçla, 8 ayrı substrat için Km ve Vmax değerlerini belirlemek üzere optimum şartlar (pH, sıcaklık ve iyonik şiddet) tesbit edildi. Optimum şartlarada 5 farklı substrat konsantrasyonunda aktivite ölçümleri yapıldı. Km değerleri katekol, 4-metil katekol, L-dopa, dopamin, gallik asit, pirogallol, L-tirozin ve p-kresol için sırasıyla 7.41x1 0"3 M, 6.06x1 0"4 M, 2.82x10-3 M, 2.64x10-3 M, 2.79x10"3 M, 8.27x10-4 M ve 8.63x10"5 M; Vmax değerleri ise aynı substratlar için 41.66, 431.96, 45.45, 42.48, 111.11, 111.73, 142.85 ve 40.00 EÜ/ml dak. olarak bulundu. Inhibitor çalışmalarında substrak olarak 4-metilkatekol kullanılarak, sodyum metabisülfit, L-sistein, askorbik asit, glutatyon, tiyoüre, sodyum azotür, sodyum dietilditiyokarbamat, ditiyoeritritol, tannik asit, benzoik asit ve p-merkaptoetanol inhibitörleri ile çalışıldı. Lineweaver-Burk grafikleri yardımıyla bu inhibitörler için Kj sabitleri ve inhibisyon türleri bulundu. Ayrıca I50 değerleri tesbit edildi. Kj sabitleri ve I50 değerlerine göre en etkili inhibitörün sodyum metabisülfit olduğu ve kompetetiv inhibisyon etkisi gösterdiği belirlendi. Enzimin sıcaklık artışına paralel olarak daha kısa sürede denature olduğu sıcaklığın düşürülmesi ile renatüre olduğu gözlendi. Enzim saflaştırıma işlemlerinde, jel filtrasyon kromatografisi ve iyon değişim kromatografisi ile iki pikin elde edilmesi ve tabii elektroforez ile iki bantın gözlenmesi iki izoenziminin varlığını gösterdi.