Manyetik Kobalt Ferrit Nanoparçacıkların Sentezi ve Histidin Etiketli Rekombinant Prepromelittinin Saflaştırılması
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Moleküler Biyoloji ve Genetik Anabilim Dalı, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2024
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: HACER KARABULUT
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): Yağmur Ünver
Eş Danışman: Ahmet Mavi
Özet:Amaç: Bu tez çalışmasında Komagataella phaffii tarafından rekombinant olarak üretilen ve potansiyel terapötik protein olan prepromelittinin (ppMEL) manyetik nanopartiküller (MNP) kullanılarak düşük maliyetli, hızlı ve etkili bir şekilde saflaştırılması amaçlandı. Yöntem: Manyetik özelliğe sahip CoFe2O4 manyetik nanopartiküller (MNP) birlikte çöktürme yöntemi ile sentezlendi. MNP'lerin karakterizasyonu için TEM (Transmisyon elektron mikroskobu) ve XRD (X ışını kırınımı) kullanıldı. Diğer yandan, genomunda ppMEL geni taşıyan K. phaffii hücreleri ile histidin etiketli rekombinant prepromelittinin (rppMEL) ekstraselüler üretimi gerçekleştirildi. 72 saatlik inkübasyon boyunca üretim ortamına 24 saatte bir %0,5 metanol ilave edildi. Sentezlenen CoFe2O4 MNP'ler ile rppMEL'in saflaştırılması için optimizasyon çalışmaları yapıldı. Bu bağlamda, MNP konsantrasyonu, MNP'lere protein bağlama (inkübasyon) süresi, saflaştırma tamponuna eklenen EDTA ve imidazol konsantrasyonu çalışıldı. Saflaştırma sonucu elde edilen proteinler SDS-PAGE'de yürütülerek gümüş boyama ile görüntülendi. Bulgular: Birlikte çöktürme metoduna göre sentezlenen CoFe2O4 MNP'lerin boyutlarının yaklaşık 20-25 nm arasında olduğu TEM ile belirlenirken kristal yapısı XRD ile belirlendi. Rekombinant K. phaffii hücrelerinin 72 saatlik inkübasyonu sonucu elde edilen kültür sıvısı saflaştırma çalışmalarında kullanıldı. MNP'lerle protein saflaştırma için yapılan optimizasyon çalışmaları sonucunda MNP konsantrasyonunun 10 mg/mL, protein bağlama (inkübasyon) süresinin 2 dakika olarak kullanılabileceği belirlendi. Sonuç: Bu tez çalışmasında CoFe2O4 MNP'leri başarılı bir şekilde sentezlendi. Kültür sıvısına salgılanan rppMEL'in, CoFe2O4 MNP'ler ile tek adımda ve kısa sürede kısmi olarak saflaştırılabildiği görüldü. Anahtar Kelimeler: Rekombinant prepromelittin, histidin, manyetik nanopartikül, CoFe2O4, saflaştırma