Akciğer Kanseri Tedavisinde Kullanılan Akt İnhibisyonunun Anti-tümör Aktivitesinde RhoB Molekülünün Regülatif Rolünün İncelenmesi

---

Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Dahili Tıp Bilimleri, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2022

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: NURULLAH AKGÜN

Danışman: Zekai Halıcı

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Amaç: Bu çalışmanın amacı küçük hücreli olmayan akciğer kanseri hücre hattında (A549) sağlanan Akt inhibisyonunun anti-tümör etkinliğinde RhoB molekülünün regülatif rolünün varlığını araştırmaktır. Materyal ve Metod: Çalışmamızın tüm aşamalarında A549 hücreleri kullanıldı. Belirlenen tedavi gruplarında Akt inhibitörü perifosin; A549 hücrelerine, siRNA aracılığıyla RhoB susturulmuş A549 hücrelerine ve deksametazon aracılığıyla RhoB up-regüle edilmiş A549 hücrelerine ayrı ayrı uygulandı. Hücre proliferasyonları xCELLigence® Gerçek Zamanlı Hücre Analizi ile tespit edildi. RhoB, pAkt ve Bcl2l11 molekülleri ELISA yöntemi ile analiz edildi. Akım sitometrisi ile apoptoz oranları belirlendi. Bulgular: 72 saatlik deney sonucuna göre siRNA aracılığıyla RhoB susturulmuş hücrelere Akt inhibitörü uygulanan grup, kontrol ve diğer tedavi gruplarına göre en fazla anti-proliferatif etki gösteren grup oldu. RhoB up-regülasyonunun Akt inhibitörünün anti-proliferatif etkinliğini azalttığı da gözlemlendi. Moleküler analizlere göre siRNA aracılığıyla RhoB susturulmuş hücrelere Akt inhibitörü uygulanan grupta, pAkt seviyesi diğer gruplara göre anlamlı şekilde düşmüş olarak tespit edildi. Ayrıca siRNA-RhoB ile RhoB molekülünün başarılı bir şekilde susturulduğu ve deksametazonun RhoB molekülünü up-regüle ettiği tespit edildi. Apoptotik bir protein olan Bcl2l11 seviyesinde ise siRNA aracılığıyla RhoB susturulmuş hücrelere Akt inhibitörü uygulanan grupta, diğer tedavi gruplarına göre anlamlı bir artış tespit edildi. Akım sitometrisi sonuçlarına göre siRNA aracılığıyla RhoB susturulmuş hücrelere Akt inhibitörü uygulanan gruptaki apoptoz yüzdesi, sadece RhoB baskılanmış ve sadece Akt inhibitörü uygulanan gruplara göre anlamlı şekilde daha yüksek tespit edildi. Sonuç: RhoB molekülünün küçük hücreli olmayan akciğer kanserinde Akt inhibisyonunun anti-tümör etkinliği üzerinde negatif yönlü bir regülatör olduğu hem proliferasyon testlerinde hem de apoptoz testlerinde tespit edildi. Bu regülasyonun mekanizmasını aydınlatmak için yapılan moleküler analizlerde hücre içinde pAkt seviyesi üzerinde RhoB'nin doğrudan etkisi olduğu belirlendi. Akt inhibitörünün fosforillenmiş Akt'yi inhibe etme yeteneğinin, RhoB up-regülasyonuyla azalırken, RhoB'nin baskılanmasıyla arttığı gözlemlendi.