Keçi ve manda sütü laktoperoksidaz enziminin bazı sülfanilamid türevleri kullanılarak afinite tekniği ile saflaştırılması

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2015

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: SONGÜL BAYRAK

Danışman: Hasan Özdemir

Özet:

Laktoperoksidaz (LPO) enziminin inhibitörü olan 2-kloro-4-sülfamoyilanilin, 5-amino-1-naftalinsülfonamid, 4-amino-3-metil sülfonamid, 3-amino-4-kloro benzensülfonamid, 4-amino-6-kloro-1,3-benzendisülfonamid, 3,4-diamino-benzensulfonamid, 6-aminopiridin-3-sulfonamid, 4'-amino[1,1'-bifenil]-4-sulfonamid molekülleri enzimin saflaştırılmasında afinite kromatografisi ligandı olarak kullanıldı. Ligand moleküller ile CNBr ile aktive edilmiş Sepharose-4B-L-tirozin afinite jelleri sentezlendi. 2-kloro-4- sülfamoyilanilin afinite kolonundan keçi sütü LPO enzimi %35,24 verimle 417,7 kat saflaştırılırken manda sütü LPO enzimi %20,34 verimle 151,86 kat saflaştırıldı. 5-amino-1-naftalin sülfonamid kolonundan ise keçi sütü %5,45 verimle 350,18 kat saflaştırılırken, manda sütü %3,48 verimle 388,80 kat saflaştırıldı. Enzimlerin saflığı SDS-PAGE ile kontrol edildi ve tek bant bulundu (80 kDa). 5-amino-1-naftalin sülfonamid kolonundan saflaştırılan keçi sütü LPO için optimum pH: 5,5, optimum sıcaklık 70°C, Km değeri 1,44 mM ve Vmax değeri 0,09 EÜ/ml iken manda sütü LPO için optimum pH: 5,5, optimum sıcaklık 70°C, Km değeri 0,08 mM ve Vmax değeri 0,52 EÜ/ml olarak tespid edildi. 5-amino-1-naftalin sülfonamid kolunu için LPO'nun bağlanma kapasitesi 10°C'de pH:8,5 ve 0,35 M iyonik şiddet konsantrasyonunda 0,05 mg/g jel olarak belirlendi.