Afinite kromatografisi tekniği ile peroksidaz enziminin kırmızı pancardan (Beta vulgaris) saflaştırılması ve karakterizasyonu

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2013

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: SEVİLAY İNAL

Danışman: Hasan Özdemir

Özet:

Bu çalışmada Sepharose-4B-L-tirozin-4-aminobenzohidrazit afinite kolonu hazırlanarak kırmızı pancar (Beta vulgaris) bitkisinden peroksidaz (POD) enzimi tek basamakta %38 verimle 196,9 kat saflaştırıldı. Kromatografik işlemler sırasında enzim aktivitesi spektrofotometrik olarak 470 nm'de ölçüldü. Saflaştırılan POD enziminin saflığını kontrol etmek ve molekül kütlesini belirlemek için SDS-poliakrilamid jel elektroforezi yapıldı. Molekül kütlesi kırmızı pancar (Beta vulgaris) POD 160 kDa bulundu. Saflaştırılan POD enzimi üzerine yapılan kinetik çalışmalar neticesinde optimum pH, optimum iyonik şiddet, optimum sıcaklık, stabil pH sırasıyla 6,5, 0,7 M, 70ºC, 6,5 olarak tespit edildi. Guaiakol substratı için enzimin KM ve Vmax değerleri hesaplandı ve kırmızı pancar (Beta vulgaris) için KM 9,09 mM ve Vmax 1,3812 EÜ/ml olarak belirlendi. Peroksidaz enzimi üzerine 4-aminobenzohidrazit inhibitörünün inhibisyon etkisi in vitro şartlarda incelendi. 4-aminobenzohidrazit inhibitörü peroksidaz için yarışmasız inhibisyon göstermekte olup IC50 değeri 0,047 mM olarak, Ki değeri ise 0,777±0,17 mM olarak tespit edildi. Anahtar Kelimeler: Peroksidaz, saflaştırma, afinite, karakterizasyon