Bitkisel kaynaklardan peroksidaz enziminin saflaştırılması ve rasemik hidroperoksidin enantiyo seçimli indirgenmesi
Tezin Türü: Doktora
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2018
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: RAMAZAN KALIN
Danışman: Hasan Özdemir
Özet:Çalışmanın birinci bölümünde çeşitli bitki kaynaklarından (beyaz turp, kırmızı turp, alabaş turp, tatlı turp, japon turpu, kara lahana, mor lahana, kırmızı pancar, yer elması ve zencefil) hazırlanan peroksidaz homojenatları ile guaiakol varlığında rac-(1-hidroperoksietil)benzenin kinetik rezolüsyonu gerçekleştirildi. Reaksiyonların stereokimyasal sonuçları kiral OD kolunu kullanılarak HPLC ile belirlendi. Elde edilen sonuçlara göre oluşan (R)-alkollerin %60-92 ve (S)-hidroperoksidin ise %76-99 aralığında değişen ee değerlerine sahip oldukları tespit edildi. Çalışmanın ikinci kısmında peroksidaz enzimi alabaş turp (Brassica oleracea L. Var. Gongylodes) ve kara lahana kökünden (Brassica oleracea L. Var. Acephala) 4-aminobenzohidrazit molekülünün ligant olarak kullanıldığı afinite kromatografisi tekniği ile ilk kez saflaştırıldı. Saflaştırılan enzimlerin saflıkları ve molekül kütleleri SDS-PAGE yöntemiyle belirlendi. Alabaş turp ve kara lahana kökünden saflaştırılan peroksidaz enzimlerinin saflaştırma sonuçları ve molekül kütleleri sırasıyla alabaş turp için %35,7 verimle 257,4 kat ve 58,2 kDa, kara lahana kökü için ise %37,2 verimle 313,4 kat ve 73,4 kDa olarak bulundu. Saflaştırılan alabaş turp ve kara lahana kökü POD'lar için optimum pH, optimum iyonik şiddet, optimum sıcaklık, guaiakol ve H2O2 substratlarının Km ve Vmax değerleri tespit edildi. Son olarak saflaştırılan POD'lar üzerine ligant olarak kullanılan 4-aminobenzohidrazit molekülünün inhibisyon parametreleri belirlendi. Elde edilen sonuçlara göre IC50 değerleri alabaş turp POD için 507,1 µM kara lahana kökü POD için ise 476,7 µM olarak bulundu. Ki değerleri alabaş turp için 741,3±83 µM, kara lahana kökü için ise 342,3±74 µM olarak hesaplandı.