4-amino benzohidrazid türevleri kullanılarak karaturp ve şalgamdan peroksidaz enziminin saflaştırılması

AYKUT ÖZTEKİN

4-amino benzohidrazid türevleri kullanılarak karaturp ve şalgamdan peroksidaz enziminin saflaştırılması

Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2016

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: AYKUT ÖZTEKİN

Danışman: Hasan Özdemir

Özet:

Bu tez kapsamında amino benzohidrazid molekülleri kullanılarak bitki peroksidaz enzimlerinin tek basamakta saflaştırılması için en etkili ve yeni afinite ligantlarının belirlenmesi hedeflendi. Bu amaçla, literatürde 4-amino benzohidrazid ile yapılan bitki peroksidaz enzimlerinin saflaştırma çalışmalarına katkı sağlamak için ilk defa 4-amino 2-metil benzohidrazid, 4-amino 3-metil benzohidrazid, 4-amino 2-metoksi benzohidrazid, 4-amino 3-metoksi benzohidrazid türev molekülleri sentezlenerek POD enzimlerinin saflaştırılmasında kullanıldı. Türev moleküllerin metilbenzoat formlarından hidrazin sentezleri yapılarak, karaturp ve şalgam POD enzimleri üzerine inhibisyon etkileri incelendi ve dönüşümlü inhibisyon gösteren moleküller Sepharose-4B-L-Tirozin jel materyaline bağlanarak elde edilen afinite jelleri ile tek kademede karaturp ve şalgam POD enzimlerinin saflaştırılması gerçekleştirildi. 4-amino 2-metil benzohidrazid molekülü kullanıldığında POD enzimi, karaturptan %14,1 verimle 211,4 kat, şalgamdan %11,7 verimle 444,6 kat, 4-amino 3-metil benzohidrazid ile karaturptan %14,2 verimle 191,6 kat, şalgamdan %10,2 verimle 234 kat, 4-amino 2-metoksi benzohidrazid ile karaturptan %33,6 verimle 676,4 kat, şalgamdan %20,1 verimle 806,7 kat, 4-amino 3-metoksi benzohidrazid ile karaturptan %10,1 verimle 244,3 kat ve şalgamdan %12,2 verimle 653,9 kat saflaştırma yapıldı. Tüm kolonlardan saflaştırılan enzimlerin molekül ağırlığı ve enzim saflığı SDS-PAGE ile kontrol edildi. Karaturp POD enzimi için 43-47 kDa'da tek bant, şalgam POD enzimi için ise 47 kDa'da tek bant gözlendi. Tüm kolonların saflaştırma sonuçları karşılaştırıldı ve en iyi kolon olan Sepharose-4B-L-Tirozin-4-amino-2-metoksi benzohidrazid kolonu için kolon tutma kapasitesi, karaturp ve şalgam POD enzimleri için değişik pH, sıcaklık, iyonik şiddetlerde (I) çalışıldı. Karaturp POD enzimi için optimum şartlar: pH 8,0, sıcaklık 15°C, I 0,35 M, şalgam POD enzimi için ise pH 8,0, sıcaklık 15°C, I 0,3 M olarak hesaplandı.