Bacillus licheniformis OSBS6’DAN AMİLAZ VE PROTEAZ ENZİMLERİNİN ÜÇLÜ FAZ AYIRMA SİSTEMİ (TPP) İLE SAFLAŞTIRILMASI VE KARAKTERİZASYONU
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Moleküler Biyoloji ve Genetik Anabilim Dalı, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2019
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: Damla RÜZGAR
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): Melda ŞİŞECİOĞLU
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Bu tez çalışması kapsamında; Türkiye'nin farklı jeotermal alanlarından sıcak su alınarak izole edilen 26 izolatın amilaz ve proteaz üretme potansiyelleri petri denemeleri ile araştırıldı. Sonuçta en geniş zon çapı veren OSBS6 izolatı seçilerek 16S rRNA sekans analizi sonucu %99 Bacillus licheniformis'e benzerlik gösterdiği tespit edildi. B. licheniformis OSBS6'dan amilaz ve proteaz enzimleri üçlü faz ayırma (TPP) sistemi ile kısmi olarak saflaştırıldıktan sonra biyokimyasal karakterizasyonları yapıldı. TPP sistemi ile amilaz enzimi pH 7,0, 1,0:1,5 (Ham enzim çözeltisi: t-bütanol oranı) ve %30 doygun amonyum sülfat kullanılarak %32,84 verimle 7,23 kat; proteaz enzimi ise pH 6,0, 1,0:1,5 (Ham enzim çözeltisi: t-bütanol oranı) ve %70 doygun amonyum sülfat kullanılarak %87,65 verimle 13,33 kat saflaştırıldı. SDS-PAGE jel elektroforez yöntemiyle amilaz ve proteaz enzimlerinin molekül ağırlıkları sırasıyla ~56,65 ve ~35,87 kDa olarak hesaplandı. B. licheniformis OSBS6'dan saflaştırılan amilaz ve proteaz enzimlerinin optimum pH'ları ise sırasıyla 9,0 ve 10,0; optimum sıcaklıkları ise sırasıyla 70°C ve 60°C olarak belirlendi. 10 mM'lık K+1 metal iyonu %8 oranında amilaz enzimini artırırken 10 mM'lık Mn+2 metal iyonu ise %92 oranında proteaz enzim aktivitesini arttırdığı tespit edildi.10 mM'lık Co+2 metal iyonu amilaz enzimini tamamen inhibe ederken proteaz enziminin ise aktivitesini düşürdüğü belirlendi. Amilaz ve proteaz enzimlerinin metaloenzim inhibitörü olan EDTA ile tamamen inhibe olduğu tespit edildi. Amilaz enzim aktivitesinin %20'lik gliserol varlığında %5 oranında artırdığı, proteaz enzim aktivitesinin %15'lik etanol varlığında %94 oranında korunduğu gözlemlendi. Amilaz ve proteaz enzimlerinin aktivitelerini %1'lik H2O2 varlığında sırasıyla %94 ve %97 oranında koruduğu belirlendi. Amilaz ve proteaz enzimlerinin sırasıyla patates nişastası ve kazeine substratlarına karşı yüksek spesifiklik gösterdiği belirlendi. B. licheniformis OSBS6'dan saflaştırılan amilaz ve proteaz enzimlerinin sırasıyla patates nişastası ve kazein subtsratları için Km ve Vmax değerleri sırasıyla 5,18 mg/mL; 5,76 mg/mL ve 0,0604 µmol.ml-1.dk-1; 27,10 µmol. ml-1.dk-1 olarak hesaplandı.