Fare genomunda bulunan kolesterol ve safra asitleri sentezinde görev alan bazı enzim genlerinin cDNA'larının üretilmesi ve in situ hibridizasyonu ile gen ekspresyon analizi

---

Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2010

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: MELDA ŞİŞECİOĞLU

Danışman: Hasan Özdemir

Özet:

Organizmalar çok sayıda gen ihtiva eder ve genlerin çoğunluğu düzenleyici proseslerde görev alan proteinleri şifrelemektedir. Gen ekspresyonunun yüksek çözünürlükteki analizi moleküler düzeyde metabolik yolların anlaşılması ve genlerin biyolojik prosesleri nasıl düzenledikleri hakkında önemli bilgiler sağlar. Gen ekspresyonunu belirlemede kullanılan pek çok metot olmakla birlikte mRNA düzeyinde uygulanan ve güçlü bir teknik olan in situ hibridizasyon bu yöntemlerin en önemlilerinden birisidir.Bu çalışmada kolesterol sentezinde görev alan Hmgcr, Pmvk, Mvd, Idi1, Ggps1, Fdps, Fdft1, Sqle, Lss, Dhcr24, Cyp51, Tm7sf2, Sc4mol, Nsdhl, Hsd17b7, Ebp, Sc5d, Dhcr7, Cyp27b1; safra asitleri sentezinde görev alan Cel, Lip1, Soat2, Cyp7a1, Srd5a2, Cyp27a1, Adh1, Adh7, Adh5, Aldh2, Aldh3a2, Aldh9a1, Aldh1b1, Slc27a5, Hadhb, Acaa1b enzim genleri için spesifik primerler dizayn edildi. Bu primerler kullanılarak spesifik cDNA kalıpları hazırlandı. Daha sonra bu cDNA kalıpları ile antisens mRNA'lar (In vitro transkripsiyon) üretildi. Üretilen antisens mRNA'lar kullanılarak 14,5 günlük fare embriyo dokularında in situ hibridizasyon yapıldı ve bu enzim genlerinin ekspresyona uğradıkları dokular belirlendi. Ekspresyon sonuçları mikroskopta incelenerek internet ortamına (www.genepaint.org) aktarıldı.