Mitokondrial Glutamat Dehidrogenaz Enziminin Koyun Karaciğerinden Saflaştırılması, Karakterizasyonu ve Enzim Aktivitesi Üzerine Bazı Metal İyonlarının Etkilerinin İncelenmesi

---

Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Kimya Anabilim Dalı, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2014

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: Uğur GÜLLER

Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): Ömer İrfan KÜFREVİOĞLU

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Bu çalışmada koyun karaciğer mitokondrisinden glutamat dehidrogenaz (NAD(P)+-spesifik EC 1.4.1.3, GDH) enzimi 2', 5'-ADP Sepharose 4B afinite kromatografisi kullanılarak ilk kez tek basamakta saflaştırılmıştır. Enzim yaklaşık olarak 1320 EÜ/mg protein spesifik aktiviteyle, %9 verimle, 272 kat elde edilmiştir. Saflaştırılan enzimin stabil pH'sı 7,0; optimum pH'sı 7,5; optimum iyonik şiddeti 500 mM K-fosfat, optimum sıcaklığı 40ºC, tabii molekül kütlesi jel filtrasyon kromatografisi ile 363 kDa ve alt birimlerinin molekül kütlesi 62 kDa olarak bulunmuş ve özdeş altı alt birimden oluştuğu tespit edilmiştir. Saflaştırılan enzimin substratlarının ve koenzimlerinin KM sabiti ve Vmax değerleri de belirlenmiştir. NADH, NADPH, α-ketoglutarat, NH4+, NAD+, NADP+ ve L-glutamat için KM sabitleri sırası ile 0,14; 1,67; 0,40; 12,92; 1,21; 0,24 ve 5,57 mM olarak, Vmax değerleri 3,86; 3,08; 1,68; 1,32; 0,81; 0,27 ve 0,46 EÜ/ml olarak bulunmuştur. Saflaştırılan enzim üzerine bazı metal iyonlarının inhibisyon etkisi araştırılmış, Ag+; Zn+2; Cu+2; Co+2; Ni+2 ve Fe+3 iyonlarının enzimi inhibe ettiği görülmüştür. İnhibisyon etkisi gösteren metallerin IC50 değerlerini belirlemek için %aktivite-[metal iyonu] grafiği ve inhibisyon türünü belirlemek ve Ki sabitini hesaplamak amacı ile Lineweaver-Burk grafikleri çizilmiş ve inhibisyon türü belirlenmiştir.