Laktoperoksidaz enziminin sığır ve koyun sütlerinden afinite kromatografisi tekniği ile saflaştırılması

---

Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2014

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: HANDE USANMAZ

Danışman: Hasan Özdemir

Özet:

Sığır sütünden laktoperoksidaz (LPO E.C.1.11.1.7) enzimi CNBr ile aktive edilmiş Sepharose-4B-L-trozin-sülfanilamid afinite kromatografisi ile saflaştırıldı. LPO üzerine 2-kloro-4-sülfamoyilanilin, 5-amino-1-naftalin sülfonilamid, 4-amino-6-kloro-1,3-benzendisülfanilamid, 4-amino-3-metil ve 3-amino-4-kloro benzensülfonilamid moleküllerinin IC50 değeri sırasıyla 346,5 µM, 57,75 µM, 11,36 µM, 86,62 µM ve 49,5 µM olarak hesaplanırken, Ki değerleri ise sırasıyla 283,32 µM, 6,74 µM, 6,39 µM 55,62 µM ve 43,67 µM olarak tespit edildi. 4-Amino-3-metil benzensülfonilamid yarışmasız inhibisyon gösterirken diğer moleküller yarışmalı inhibisyon gösterdi. İnhibisyon gösteren moleküllerin her biri için afinite jelleri hazırlanarak sığır sütünden LPO enziminin saflaştırma tabloları hazırlandı. Saflaştırma basamakları sonucunda 2-kloro-4-sülfamoyilanilin kolonundan sığır sütü LPO enzimi %12 verimle 453 kat saflaştırılırken koyun sütü LPO enzimi %13 verimle 869 kat saflaştırıldı. Enzimlerin saflığı SDS-PAGE ile kontrol edildi ve tek bant bulundu (80 kDa). 2-kloro-4-sülfamoyilanilin kolonudan saflaştırılan sığır sütü LPO için optimum pH 6,0, optimum sıcaklık 42°C, KM değeri 0,13 mM ve Vmax değeri 0,55 EÜ/ml.dk iken koyun sütü LPO için optimum pH 5,5, optimum sıcaklık 60°C, KM değeri 0,74, mM ve Vmax değeri 0,05 EÜ/ml.dk olarak tespid edildi. 2-Kloro-4-sülfamoyilanilin kolunu için LPO'nun bağlanma kapasitesi 15°C'de pH:8,5 ve 0,35 M iyonik şiddet konsantrasyonunda 9,65 mg/g jel olarak belirlendi.